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    細胞培養服務為你帶來細胞培養具體步驟和要求

    發布時間: 2022-05-30  點擊次數: 338次
     
      細胞培養是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養服務是伊萊博生物的基礎服務項目之一。
      培養多種細胞并能在細胞內穩定或瞬時轉染特定的受體或蛋白,耐藥細胞株的構建。生長抑制及細胞毒實驗細胞信號轉導系統的生物化學研究:可提供包括G蛋白、cAMP、DAG、CREB、鈣離子、MAPK傳導通路等多種信號分子在內的信號轉導研究技術支持。凋亡測定(caspases,annexinVandDNAfragmentation,線粒體膜電位的測定),細胞凋亡及周期測定(流式細胞術)與細胞侵襲轉移相關的實驗:黏附、轉移和侵襲與細胞分化相關的實驗細胞衰老實驗
      細胞培養服務的細胞培養具體步驟和要求以及注意事項:
      一、復蘇
      1、把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
      2、把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
      3、把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。
      4、標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。
      5、3天換一次培養基。
      二、傳代
      1、培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
      2、把原有培養基吸掉。
      3、加適當的胰蛋b酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
      4、細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
      5、用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
      6、把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
      7、倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
      8、根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。
      三、凍存
      把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
      凍存液的配制:70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
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